方法原理:
1、酸水解法
常規(guī)(直接)水解法是使飼料蛋白在110°C、6mol/L鹽酸作用下,水解成單一氨基酸,再經(jīng)離子交換色譜法分離并以茚三酮做柱后衍生測定。水解中,色氨酸全部破壞,不能測量。胱氨酸和蛋氨酸部分氧化,不能測準。氧化水解法是將飼料蛋白中的含硫氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸等)用過甲酸氧化,然后進行酸解,再經(jīng)離子交換色譜分離、測定。水解中色氨酸被破壞,不能測定。酪氨酸在以偏重亞硫酸鈉做氧化終止劑時,被氧化,不能測準。酪氨酸、苯丙氨酸和組氨酸則坐終止劑時被氧化,不能測準。
2、堿水解法
飼料蛋白在110°C、堿的作用下水解,水解出的色氨酸可用離子交換色譜或高校反相色譜分離、測定。
3、酸提取法
飼料中添加的氨基酸以稀鹽酸提取,再經(jīng)離子交換色譜分離、測定。
儀器、設(shè)備:
1、實驗室用樣品粉碎機
2、樣品篩:孔徑 0.25mm
3、分析天平:感量0.0001g
4、真空泵與真空規(guī)
5、噴燈或熔焊機
6、恒溫箱或水解爐
7、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器或濃縮器:可在室溫至65°C間調(diào)溫,控溫精度±1°C,真空度可低至3.3×10三次方Pa
8、氨基酸自動分析儀:茚三酮柱后衍生離子交換色譜儀,要求各氨基酸的分辨率>90%